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    MUGal培养基原理和使用方法

    张辉
    录入时间:2021-5-7 11:17:46 来源:青岛海博生物

    一、大肠菌群简介


      大肠菌群是指一群在37℃培养24h发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。主要由肠杆菌科中四个属内的一些细菌所组成,即埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属以及肠杆菌属。该菌主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。


    二、试验原理


      MUGal培养基可用于大肠菌群快速检测。培养基中的胰蛋白胨作为培养基中的基础营养物质,提供细菌生长所需的碳氮源、维生素和其他的生长因子;氯化钠维持培养基体系的渗透压平衡;磷酸二氢钾和磷酸氢二钾是培养基pH缓冲剂;月桂基硫酸钠抑制革兰氏阳性菌;大肠菌群可产生β-半乳糖苷酶,分解液体培养基中的酶底物4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷MUGal,使4-甲基伞形酮游离,在波长366nm紫外灯照射下呈现蓝色荧光。


    三、培养基配方(g/L)


    胰酪蛋白胨 20.0
    氯化钠 5.0
    磷酸氢二钾 2.75
    磷酸二氢钾 2.75
    月桂基硫酸钠 0.1
    MUGal 0.05
    pH值7.0-7.2 25℃


    四、试验方法


      1.称取本品30.7g,加热搅拌溶解于1000mL蒸馏水中,分装于20mm×150mm试管中,每管9mL,116℃高压灭菌10分钟,待培养基冷却后,以无菌操作于每管培养液内加入0.1mL经无菌水稀释的500ug/ml头孢磺啶液,备用。


      2.10倍梯度稀释法制备质控菌液。


      3.选择合适稀释度的质控菌液100μL,接种到试管中,每一稀释度接种两个平行管;同时吸取稀释液100μL,接种到试管中作为空白对照。


      4. 放置36±1℃需氧培养24-48小时,记录试验结果。


    五、试验结果判断


      接种以下质控菌株,放置36±1℃需氧培养18-24小时。

    质控菌株

    菌株编号

    接种量(CFU)

    方法

    生长情况

    其他特征

    大肠埃希氏菌

    ATCC25922

    10-100

    定量

    +++

    浑浊,产荧光

    产气肠杆菌

    CMCC(B)45103

    10-100

    定量

    +++

    浑浊,产荧光

    鼠伤寒沙门氏菌

    ATCC14028

    10-100

    定量

    +++

    浑浊,不产荧光

    金黄色葡萄球菌

    ATCC6538

    100-1000

    定量

    -

    抑制


      MUGal培养基质控结果:

    正常光线下

    a:空白对照;b:大肠杆菌;c:产气肠杆菌;d:鼠伤寒沙门氏菌;e:金黄色葡萄球菌

    366nm紫外灯照射下

    a:空白对照;b:大肠杆菌;c:产气肠杆菌;d:鼠伤寒沙门氏菌;e:金黄色葡萄球菌

     

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